Bei der Differenzbestimmung von Enterobakterien und einigen Vibrionen nimmt die Voges-Proskauer-Reaktion eine besondere Stellung ein. Der Test basiert auf der Fähigkeit von Bakterien, Glukose zu Acetoin zu fermentieren.
Die Essenz des Forschungsprozesses
In der Mikrobiologie wird die Voges-Proskauer-Reaktion häufig verwendet, um innerhalb der Yersinia-Familie von Enterobakterien (einschließlich der Erreger von Pseudotuberkulose und Enterokolitis), Escherichia coli und sporenbildenden Aerobiern zu unterscheiden. Das Ergebnis wird sichtbar gemacht, indem das Medium gefärbt wird, wenn bestimmte Reagenzien hinzugefügt werden.
Dieser Test gehört zur IMViC-Reihe (Abkürzung für Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - einer Gruppe von Identifikationstests inklusive differentieller Definitionen:
- mit Indol, basierend auf dem Abbau von Tryptophan zu Indol, verwendet in Gegenwart eines Kovacs- oder Ehrlich-Reagenzes;
- benutztMethylroth oder Methylrot, das einen bestimmten pH-Wert als Ergebnis der Glukosemetabolisierung erkennt;
- Voges-Proskauer-Reaktionen zum Nachweis von Acetyl-Methylcarbinol;
- Verwertung von Citrat mit Farbumschlag durch Alkalisierung des Mediums.
Die Essenz des Prozesses ist die Visualisierung des Vorhandenseins diagnostizierter Bakterien aufgrund der Wechselwirkung von Acetoin, das von ihnen mit Ätzkali in Gegenwart von Sauerstoff gebildet wird. Acetylmethylcarbinol wird zu Diacetyl oxidiert, das eine hellrote oder rosafarbene Verbindung bildet. Erhöhen Sie die Empfindlichkeit des Tests, indem Sie vor der Zugabe von Ätzkali Alpha-Naphthol einführen.
Testeinstellung
Die Formulierung der Voges-Proskauer-Reaktion beinh altet die Vorkultivierung von Mikroorganismen. Eine Reinkultur wird auf Clarks differenzialdiagnostischem Medium ausgesät, eine Variante davon ist Clarks Bouillon (ohne Zugabe von Agar-Agar). Es wird entweder fertiges Medium verwendet oder unabhängig hergestellt. Zu den Zutaten gehören:
- 5g Pepton;
- 5g Glukose;
- 5g dibasisches Kaliumphosphat;
- 1L Destillat.
Während der Studie wird die Kultur mit einer sterilen bakteriologischen Öse in ein flüssiges Medium inokuliert. Menge - 5 ml in einem Reagenzglas plus Kontrolle. Die Inkubation erfolgt zwei Tage lang bei einer Temperatur von 35-37 Grad. Als nächstes wird eine schrittweise Untersuchung der Voges-Proskauer-Reaktion durchgeführt:
- 2, 5 ml Bouillonkultur werden in ein steriles Röhrchen überführt.
- Füge sechs Tropfen Alpha-Naphthol (5%ige Alkohollösung) hinzu.
- 40 % hinzufügeneine Lösung von ätzendem Kalium in einer Menge von 0,1 ml oder zwei Tropfen.
- Das Rühren erfolgt durch leichtes Schütteln des Reagenzglases.
- Werte das Ergebnis 15 Minuten nach Versuchsbeginn aus.
Eine alternative Testmethode ist die Inkubation über Nacht, deren Dauer auf 18 Stunden oder bis zu einem Tag verkürzt wird. Neben dieser Methode wird auch ein Expresstest verwendet: Eine Kultur wird in einer Schleife in 2 ml des Mediums eingebracht, etwa vier Stunden inkubiert, dann werden Reagenzien in einer gleichen Menge von 2-3 Tropfen hinzugefügt, gemischt und die Ergebnis wird nach zehn Minuten ausgewertet.
Die Kontrolle ist einer der Erreger der Lungenentzündung Klebsiella pneumoniae - Stamm atcc 13883.
Auswertung des Ergebnisses
Nach der erforderlichen Zeit nach Zugabe der Reagenzien (von 5 bis 15 Minuten) sollte eine kirschrote Farbe mit einer ausgeprägten positiven Reaktion, rot und rosa - mit einer schwachen positiven Reaktion beobachtet werden. Keine Änderung wird als negatives Ergebnis aufgezeichnet.
Überschüssige Kalilauge in einer Lösung kann eine positive Reaktion vortäuschen, indem sie sich kupferfarben verfärbt. In diesem Fall sollte die negative Reaktion der getesteten Kolonie aufgezeichnet werden. Kupferflecken treten auch in Fällen auf, in denen die Bewertung eine Stunde nach dem Einbringen der Reagenzien erfolgt.
Bei der Bewertung des Ergebnisses muss berücksichtigt werden, dass eine längere Kultivierung der untersuchten Mikroorganismen (mehr als drei Tage) zu einer Ansäuerung des Mediums führt, was zu einem falschen Ergebnis der Studie führen kann. Die Reaktion kann leicht positiv sein oderfalsch negativ.
Anforderungen an Testreagenzien
Voges-Proskauer-Reagenzien müssen Anforderungen wie richtige Konzentration, hohe Reinheit und Stabilität erfüllen, die durch sachgemäße Lagerung erreicht wird.
Gebrauchsfertige Testkits enth alten in der Regel Reagenzien für 100 oder mehr Anwendungen und sind in Kunststoff- oder getönten Glasfläschchen erhältlich. Die Qualität wird durch die entsprechende Dokumentation geregelt.
